电杆菌做法
电杆菌(通常指的是农杆菌)的电转化是一种常用的基因转移方法。以下是电转化农杆菌的一般步骤:
制备感受态细胞
从-80℃冰箱中取出保存的农杆菌菌株,划线或接种到LB培养基中,37℃培养过夜。
第二天,将过夜培养物接种到含有适当抗生素的LB培养基中,继续培养至对数生长期(OD600约为0.5~0.6)。
将培养物冷却至4℃,离心收集细胞,并用预冷的10%甘油洗涤细胞两次。
最后,将细胞重悬于含有10%甘油的冰上,分装并保存于-80℃备用。
电转化
将感受态细胞从冰箱中取出,立即用于电转化。
准备电转化杯,通常使用预冷的4mm电转化杯,加入适量的感受态细胞和质粒(质粒浓度约为10ng/μL)。
将电转化杯放入电击器中,根据菌株的不同,选择合适的电击参数(如1800V,1cm电转化杯)。
电击后,立即将电转化杯中的液体转移到含有适当培养基(如LB+抗生素)的离心管中,轻轻摇晃以复苏细胞。
复苏和涂平板
将复苏后的细胞在28℃恒温摇床中培养一段时间(如2小时)。